《粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B1测定》征求意见

　　【仪表网 行业标准】 由国家粮食和物资储备局组织起草的《粮油检验 谷物中黄曲霉毒素 B1测定 超导量点免疫荧光快速定量法》标准已形成征求意见稿，现向社会公开征求意见，截止日期为2023年7月19日。意见反馈邮箱：tc270sc1@ags.ac.cn。
 

　　黄曲霉毒素 B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。黄曲霉毒素 B1对人和动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。在天然食物中以黄曲霉毒素 B1最为多见，危害性也最强，是大部分食品的必检项目之一。
 

　　粮食作为我国饮食结构金字塔最底端，在我国居民饮食结构中所占比例最高，其质量安全更是不容小觑。然而，粮食真菌毒素污染事件时有发生，据联合国粮农组织估计，全世界谷物供应 25%受真菌毒素污染而不能食用，其中又以黄曲霉毒素污染最为严重。因此，大力发展准确、高效的黄曲霉毒素快速检测技术，提高粮食黄曲霉毒素的监管时效性，对把好粮食市场准入关，确保粮食流通安全具有重要现实意义。
 

　　在当前绿色、安全的粮食发展背景下，粮食污染物快速检测技术是粮食行业的发展重点，各种快速检测方法纷纷涌现，为粮食安全的保驾护航发挥了重要作用。为确保方法使用的合法性，将这些快速检测方法进行严谨的验证并形成方法标准符合当前政策和形势，也符合社会需求。目前，已形成标准的真菌毒素快速检测方法主要是酶联免疫法和胶体金快速定量法，尚不足以完全满足当前行业对真菌毒素快速检测技术的需求。本项目以超导量点免疫荧光技术为基础，利用超导量点的增敏作用，有效提高了黄曲霉毒素 B1的检测灵敏度和准确性。同时，该方法对样品前处理方法进行优化，结合该方法测定样品时较短的上机时间，大大缩短了样品的检测时间，提高了样品的检测效率。该方法形成标准将为粮食黄曲霉素 B1的监管准确性和时效性发挥重要作用。
 

　　本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
 

　　本文件规定了谷物中黄曲霉毒素B1的超导量点免疫荧光快速定量检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、样品测定、结果表述、重复性。本文件适用于小麦、稻谷、玉米等谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的快速定量检测。方法检出限为0.5μg/kg，定量限为1.5μg/kg。
 

　　原理：
 

　　本方法基于超导量点标记的抗原抗体反应，采用荧光侧向免疫层析(Fluorescent Lateral Flow，FLF)方法学原理。试样中的黄曲霉毒素B1抗原和固定在检测线T线上的黄曲霉毒素B1抗原与超导量点标记黄曲霉毒素B1抗体竞争反应，荧光分析仪读取的荧光信号与试样中黄曲霉毒素B1含量呈反比，根据仪器内置曲线自动计算样品中黄曲霉毒素B1的含量。
 

　　仪器设备及材料：
 

　　除实验室常规仪器、设备外，需用到下列仪器设备。
 

　　1.天平：分度值 0.01g。
 

　　2.粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目筛。
 

　　3.离心机：转速不低于4000r/min。
 

　　4.涡旋振荡器。
 

　　5.免疫荧光分析仪：可测定并显示超导量点免疫荧光定量检测卡的测定结果。
 

　　6.QD-Infinity 黄曲霉毒素 B1超导量点免疫荧光定量检测卡1：常温避光储存，具体储存条件参照使用说明；技术要求见附录 A。
 

　　7.滤纸：中速定量滤纸。
 

　　8.计时器。
 

　　样品测定：
 

　　1.开启免疫荧光分析仪(5.5)。
 

　　2.将超导量点免疫荧光定量检测卡(5.6)从冷藏状态取出放置至室温，加样孔朝上平放。
 

　　3.准确移取 75 μL 待测液(6.2.2)，加入检测卡加样孔中。
 

　　4.检测卡加样后，水平静置反应15min，然后在3min 内将检测卡插入免疫荧光分析仪(5.5)，仪器将自动进行检测。
 

　　5.免疫荧光分析仪(5.5)自动完成数据读取、分析、显示并保存检测结果。
 

　　若显示值>50μg/kg，则移取100μL6.2.2 中滤液或上清液，加入300μL 试样提取液(4.2)，充分混匀后取100μL 至一洁净的离心管中，加入400μL 稀释缓冲液(4.1)，充分混匀，按照8.2～8.5进行测定。
 

　　结果表述：
 

　　试样中黄曲霉毒素B1的含量由免疫荧光分析仪自动计算并显示，单位为微克每千克(μg/kg)。
 

　　重复性：
 

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。
 

　　更多详情请见附件。