ANDLE叶绿素荧光仪的操作方法

叶绿素荧光仪是用来检测植物光合作用能量转换效率的仪器，叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而在反射光下呈红色。叶片对光能的吸收，叶子之所以呈绿色是因为他吸收红光和蓝光，而反射绿光的缘故，入射到叶片表面的光，经过反射、散射、透射、有一大部分会被吸收利用。叶绿素荧光技术广泛应用于植物光合作用效率、植物逆境胁迫、育种筛选和植物健康评价等方面的研究，被称为植物光合作用研究无损伤的探针。水陆两用自动荧光测量系统由澳大利亚悉尼大学的Runcie博士带领团队设计；采用的“快门”式荧光技术，在测量时系统按照预设程序自动的旋转荧光探头到叶片表面，而在测量间期探头自动旋转到叶片侧面，从而既避免了人为干扰，又保证了测量叶片始终处于自然状态。系统既可以在陆地使用，也可以在各种水体中使用；既可以连接多达8个荧光探头实现多点长期无人值守的连续测量，又可以拆分为单探头的便携式荧光仪从而实现调查式测量。

叶绿素荧光仪的特点

陆地和水体双用型设计，真正实现一机两用

既可以单探头便携式测量，又可以多探头长期连续自动测量

“ 快门”式荧光探头可自动旋转，随时测量F0，并计算NPQ

直接测量∆F/Fm’和Fv/Fm等来评价光合作用效率

利用远红光激发PS1电子

可以利用光化光进行快速光响应曲线测量，光诱导曲线或者客户自定义的辐射处理

数据采集器与电源分离设计，能够同时进行一个或者多个传感器操作

软件界面友好，可以选择自带程序或者自定义程序

可以利用程序自动完成72小时的自动测量

全防水设计，316不锈钢铸件，耐侵蚀

可以测量温度、PAR（余弦矫正传感器）

测量光、光化光、饱和光：蓝色或者白色LED灯

远红光：735nmLED灯

光路过滤器：光腔内695nm

阻尼：103

叶室关闭周期：5秒到9999秒

叶室打开周期：用户自定义

电池寿命：能够满足至少72小时

zui大压力：50米水深

操作温度：-2到40摄氏度

存储温度：-5到50摄氏度

温度测量：传感器内部的热敏电阻

辐射测量：余弦矫正的传感器

叶绿素荧光仪的组成

调制叶绿素荧光仪离不开光调制技术，有了它才能使得我们在有环境光的情况下测量叶绿素荧光；其次就是饱和脉冲技术。所谓饱和脉冲技术，就是提供一个瞬间的强光脉冲，来暂时打断光系统II电子传递过程。光合机构吸收的光能有三条去激途径：光化学反应p、叶绿素荧光f和热耗散d。根据能量守恒原理，假设吸收的光能为常数1，得到1=P+F+D。叶绿素荧光产量可以测量出来，而我们希望得出P和D两个参数。根据基本的数学原理，一个等式有两个未知数是无解的。此时如果给出一个饱和脉冲，暂时打断光化学反应过程，则P=0这个等式就可以求解了。由此可知，饱和脉冲技术的基本作用就是打断光合作用，用于求出光化学反应和热耗散分别用去了多少能量。理想的荧光仪必须能在不改变样品状态的情况下即非破坏性进行生理活性测量，需要满足如下几条要求:
1、测量光必须足够低，只激发色素的本底荧光而不引起光合作用，这样才能获得暗适应后的zui小荧光Fo
2、测量光由一系列微秒级的光脉冲组成，这些短光脉冲可以不同的频率给出。在很低的频率下，即使单个微秒级光脉冲的强度比较高，也不会引起光合作用；
3、用反应迅速、线性范围大的光电二极管或光电倍增管来检测这些由微秒级测量光脉冲激 发的微秒级荧光脉冲；荧光脉冲信号首先由交流耦合放大器放大，然后进一步经选择性锁相放大器处理，只放大和调制测量光同频率的荧光信号，可以有效屏蔽环境中本身就存在的与叶绿素荧光同波长的背景噪音。
4、当打开光化光或饱和脉冲时，可以自动提高测量光频率，以提高信号采点率，有效记录一些比较快速的荧光动力学变化。

叶绿素荧光仪光合作用机理

光合作用的是能量及物质的转化过程，首先由叶绿素将光能转化成电能，经电子传递产生ATP和NADPH形式的不稳定化学能，zui终转化成稳定的化学能储存在糖类化合物中。
光反应：吸收光能，合成一些如ATP、NADPH等高能物质，用以维持细胞生长；
暗反应：利用ATP、NADPH固定二氧化碳，生成一些列碳水化合物 叶绿素荧光动力学包含着光合作用过程的重要信息，如光能的吸收和转化。能量的传递与分配、反应中心的状态，过剩能量的耗散以及反映光合作用的光抑制和光破坏。应用叶绿素荧光可以对植物材料进行原位、无损伤的检测，且操作步骤简单。所以叶绿素荧光越来越受到人们的青睐，在光合生理和逆境生理等研究领域有着广泛的应用。

叶绿素荧光仪构成

电源，光源：测量光源、光化光源、饱和光源，信号探测器 滤波器（荧光波段通过），其他传感器。

叶绿素荧光仪应用领域

植物生理学，物生态学，植物病理学，农学，林学，园艺学，遗传育种，突变株筛选，环境科学，毒理学，水生物学。

叶绿素荧光仪荧光诱导

只要能够引起光合作用的光也就是波长在400-700nm的可见光，都可以进行荧光诱导，专业术语叫做光化光，也被称为作用光。在光合作用领域，400-700nm的光也被称为光合有效辐射。光化光可以为人工光，如来自日光灯、卤素灯或发光二极管的光，也可以为自然光。但为了使我们的实验具有可重复性，多数荧光诱导的测量会采用仪器提供的 恒定光强的人工光来诱导。只有保证测量条件*，才能对不同材料或不同处理的样品进行直接比较。