2 操作方法

2.1水样品检测

2.1.1水样过滤：将灭菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用灭菌镊子夹取直径47 mm～50 mm，孔径为0.45μm的灭菌滤膜，放在滤器底部，旋紧盖子，将250mL水样注入滤器中抽滤。

2.1.2 揭开检测板上层膜，在检测板纸片上加1 mL无菌水湿润后，迅速用无菌镊子将过滤水样的滤膜移放在检测板纸片上（滤膜截留细菌面向上），滤膜与纸片之间不要夹留着气泡，贴好上层膜。

2.2食品样品检测

2.2.1 取25 g（或25 mL）样品放入装有225 mL生理盐水的均质袋中，以8000 r/min均质1～2 min，制成1:10样品均液，根据样品污染程度及检验需要，可进一步制成10倍递增的样品稀释液。

2.2.2将粪链球菌检测板上层膜不干胶标签部分揭开，用无菌吸管吸取1 mL样品稀释液均匀滴加到纸片上，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，静置10 s左右，待样品稀释液被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两个检测板作为重复。

2.3培养：将检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内，36℃±1℃，培养15～24 h。

3 结果判读

在检测板（滤膜）上生长的红色带黄晕的斑点即为粪链球菌阳性，若纸片上的红色斑点无黄晕则为粪链球菌阴性。

4 计数原则及报告方式

4.1 滤膜过滤水样：以滤过一张无菌滤膜后产生的菌落数计算，选择菌落数在20～100CFU的检测板进行计数后即为250mL水样品中含的菌落数。结果以CFU/250 mL为单位报告。

4.2食品样品计数

4.2.1以生长有30～300CFU的检测板为计数适宜范围。

4.2.2若只有一个稀释度检测板上的菌落数在计数合适范围30～300CFU之间，则计算两个检测板菌落数的平均值，再除以相应的稀释倍数，作为每克（毫升）中菌落数结果。

4.2.3若有两个连续稀释度在适宜计数范围内时，按式（1）计算：

∑C

N=———————— •••••••••••••••••••（1）

（n1+0.1n2）d

式中：

N——样品中粪链球菌菌落数；

∑C——两个连续稀释度检测板（含适宜范围菌落数的检测板）粪链球菌菌落之和；

n1——适宜范围菌落数的个稀释度（低）检测板个数

n2——适宜范围菌落数的第二个稀释度（高）检测板个数

d——稀释度的稀释倍数

示例：

（245+247+31+30）

N=——————————=2514

（2+0.1×2）×10-1

结果表述为2.5×103CFU/g(ml)。

4.2.4若有稀释度检测板上均无菌落生长，则以小于1/d（d—低稀释倍数）计算。

4.2.5低数值的估算：如果实验样品原液（水及液体饮料）或初始稀释悬液（其他样品）的两个检测板上的菌落数均小于30CFU，计算两个检测板上的菌落数的平均数。计算式（2）：

∑C

NE =—— •••••••••••••••••••（2）

nd

式中：

NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；

∑C——两个检测板上菌落数的和；

n——检测板的数量；

d——样品初始悬液或实际接种悬液的稀释倍数。

4.2.6大数值的估算：若有稀释度的检测板上菌落数均大于300CFU，计数接近300CFU的检测板上的菌落并计算出平均数，其他检测板可记录为多不可计。结果计算式（3）：

∑C

NE =—— •••••••••••••••••••（3）

nd

式中：

NE——每毫升或每克样品中菌数的估算值；

∑C——两个检测板上菌落数之和；

n——检测板的数量；

d——与样品悬液相一致的稀释倍数。

5结果报告

固体样品以CFU/g为单位报告，液体样品以CFU/mL为单位报告。

6附加说明

注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。

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