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细胞或组织的具体方法
2024-03-31 07:41:24来源:研域(上海)化学试剂有限公司 阅读量:0
导读:
因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒)。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。免疫组织化学染色方法
1、按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。
2、按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法);与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。
3、按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法和亲和连接,如卵白素-*-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗*蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是zui常用的方法。抗病毒活性测定法:检测样品中干扰素的含量zui常用的方法是检测其抗病毒活性,其检测原理是用细胞因子样品处理易感细胞,使细胞建立抗病毒状态,然后用适量病毒攻击细胞,评价病毒的复制量或病毒引起细胞病变的程度即可判断样品中细胞因子的生物活性。
常用于检测抗病毒活性的细胞株有WISH,Hep2/c,L929,A549和MDBK等。其中WISH和Hep2/c细胞株用以检测人干扰素,L929细胞株用于检测小鼠干扰素,Ratec细胞株用于检测大鼠干扰素,而MDBK细胞株则可用于检测多种族的IFN-α和IFN-γ。常用于攻击细胞的病毒有滤泡性口炎病毒(VSV)、鼠脑心肌炎病毒(EMCV)以及Sindbis virus等病毒。
检测抗病毒活性包括测定细胞因子抑制病毒的致细胞病变效应(CPE)、抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量等。 IFN的抗病毒活性通常以每毫升样品中所含的单位数(U/ml)表达,IFN的纯度则以每毫克蛋白质中所含的单位数(U/mg)或IFN的量(μg/mg)表达。IFN抗病毒活性单位的定义是指能抑制50%细胞病变或50%病毒空斑形成效应的IFNzui高稀释度的倒数。