gⅥ-cDNA噬菌粒文库小规模的获取和纯化

2025

01-29

07:23:13

 3

来源：上海锐谷生物科技有限公司

[器材和试剂]

●通用设备及试剂以及以下的设备和试剂：

●无菌96孔带盖培养板（Costar）

●LBAT

●R408辅助噬菌体（Stratagene）

●振荡孵育箱

●96孔复制板

●PEG/NaCl（

●PBS

[方法]

1．将克隆体接种到100ul LBAT 96孔培养板上，并在37℃过夜振荡培养（180r/min）。

2．使用96孔复制板将其接种到装有200ul LBAT的第二块96孔培养板上，在37℃培养直到生长中期（大约1，5小时）。

3．在每一孔中加入10ul 2×10¹¹TU/mlR408辅助噬菌体。

4．37℃无振荡培养30分钟。

5．37℃过夜振荡培养。

6．4℃800g离心20分钟，收集细胞。

7．将上清液转移到一新的96孔培养板上，并加40pul PEG/NaCl。

8．将板放置于冰上1小时。

9．4℃800g离心20分钟，收集噬菌体颗粒，小心除去上清液，在50ulPBS溶液中打散颗粒。

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