中性粒细胞趋化试验检测IL-8

ID8是中性粒细胞的激活剂和趋化因子；本法通过检测中性粒细胞的迁移距离来反映IL-8活性。
（1）配制2倍浓度的DMEM培养液100mL，其中含20mL的FCS，75mgNaHC03，置48C水浴预温。
（2）配制2％琼脂糖，水浴中保温48℃左右时，与上述2XDMEM等量混匀。
（3）制片（3mlJ片），室温凝固后，放4~C 30～60min进一步凝固，打孔。
（4）分离人外周血中性粒细胞，用DMEM调整细胞浓度为2．5×105／mL，取lOgL细胞悬液加人各组中心孔，上孔分别加10／uL含趋化因子的待检样品及rlL-8或其他阳性对照趋化因子，下孔加lOgLDMEM作阴性对照。
（5）将玻片放湿盒中，37~C温育2h后，甲醇固定30min，瑞氏染液染片并干燥。
（6）显微镜下分别测量细胞从中心孑L边缘朝向样品孔游走的距离（趋化游走距离）及朝向阴性对照孔的游走距离（自发游走距离），趋化活性以趋化指数表示。
为证实样品中趋化效应是IL-8特异的，还需将抗IL-8中和抗体先与待测样品混合，孵育1h后，加入玻片孔中，观察趋化反应。亦可用其他相关抗体阻断试验区别IL-8及其他趋化因子的作用。