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在细胞传代培育过程中的原则、注意事项

2022
07-03

10:50:01

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来源:化工仪器网

在生物医学试验中常常会用到细胞系,指原代细胞培育物经传代成功后所繁衍的细胞群体。也指可*连续传代的培育细胞。细胞系是经过细胞传代或续代培育是将细胞从现有的培育物分隔或分出来开端新的培育,并参加新鲜培育液来促进扩增的常用手法。可是细胞系与新分离的或原代细胞的培育条件相类似,但也有一些根本不同的当地:
(1)每个细胞系需求其特定的成长因子混合物
(2)与原代细胞比较,它们的成长需求更严密的监测,由于使它们无限成长的突变同时也会形成它们很快到达过度成长。因而,当细胞系成长到了简直覆盖整个培育器皿底部,也便是90%的密度时,细胞需求重悬洗涤用于试验或冻存以备将来运用,或许重新接种到新的培育器皿进一步扩增。


一、细胞换液注意事项:
首要要注意细胞培育液的色彩,富含营养的新鲜培育液由于添加了pH指示剂酚红故为透明橙色。当细胞耗尽培育液中的营养成分时,开端在培育物中堆集废物和酸性物质,下降pH值。因而,许多细胞培育液含有酚红,当培育物呈酸性时会将培育液色彩由橙色变为黄色。培育液需在变黄之前替换。当酚红变为粉红色时,说明培育基pH偏碱,不利于细胞健康成长。这时或许需求改变二氧化碳浓度并替换培育液。许多贴壁细胞系可天然附着于无涂层的塑料上。

因而,塑料细胞培育板如培育皿或六孔板常常用于传代细胞。塑料的细胞培育瓶也常常用到,如T25的细胞培育瓶,常用于扩增培育数目少的细胞或许开端培育成长缓慢的细胞系。T75细胞培育瓶常用在培育扩增速度较快的细胞系或用于成长超越T25培育瓶容量的很多细胞。在搬运贴壁细胞时,要先剪切掉细胞上与和塑料结合的蛋白。因而,消化酶*常用于消化细胞。控制*消化的时间很重要,由于假如处理时间过长会损坏细胞外表的蛋白。细胞培育液能中和*。
所以在*消化前常用磷酸缓冲液或PBS洗涤细胞。EDTA,一种钙螯合剂有时候也用于提高*的蛋白水解功能。为扩增细胞克隆,将新鲜传代的细胞培育于细胞培育箱中,挑选适合该细胞成长条件,一般为温度37度,二氧化碳5%和湿度95%。
 

二、传代的不同运用:
人胚胎干细胞是一类有必要传代的细胞。它们一般与小鼠成纤维细胞MEF共培育,后者能供给协助干细胞坚持其多能性的因子。成善于养殖细胞上的干细胞到了适宜的发育阶段时需挑出来。可用微型移液管挑出或用玻璃工具轻轻将其刮下然后接种于新的培育液中进行扩增。有一些细胞系对酶消化灵敏,或许贴壁很紧无法运用*处理来重悬。细胞刮常用来轻轻将细胞从培育板的底部刮下来。假如细胞贴壁特别紧,可参加培育液或恰当溶液后用血清吸管用力刮擦。运用该方法时要当心,细胞比较脆弱,容易在这种机械剥离的方法中受损。为了更快并可重复性的很多扩增细胞到超越单层培育瓶容量的规模,可以运用多层培育瓶,它的培育量可达单层培育瓶的3-5倍。

 

三、细胞传代的操作步骤
首要,重要的是要清楚细胞需求监测的频频程度,这取决于该细胞的扩增速度。现在培育液为亮橙色,再观察其它成长情况。如培育液是否污浊-如污浊则或许有污染, 细胞的巨细和密度以及细胞的整体质量。假如细胞密度到达90%,吸去细胞培育液,用无钙离子和镁离子的磷酸缓冲液洗涤。然后参加*,置于37摄氏度约5分钟,承认细胞脱壁后,参加新鲜细胞培育液停止*的水解。将悬浮的细胞搬运到锥形管离心。细胞离心下来后,当心弃去上清,重悬细胞于新鲜培育液。计数收集到的细胞然后依据适宜密度接种细胞当即进行扩增或用于将来扩增。

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