化学感受态细胞基础操作方法

2022

07-02

22:00:02

 30

来源：赛尔瑞成（北京）生命科学技术有限公司

　　化学感受态细胞该菌株衍生自大肠杆菌菌株B，具有lon和ompT蛋白酶缺陷的优点，是目前应用广泛的表达宿主菌之一，其操作方法如下：

　　1、化学感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，6分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手滑动EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

　　2、42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置5分钟，晃动会降低转化效率。

　　3、向离心管中加入0.9mL室温S.O.C.(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)或LB培养基。

　　4、30℃，250rpm复苏60分钟。当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化controlpUC19计算转化效率，则需37℃，225rpm复苏60分钟

　　5、筛选平板提前拿出放30℃孵育使平板温度保持30℃，吸取50-100μl直接涂筛选平板或5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

　　6、将平板倒置放于30℃培养20-24小时或37℃过夜培养。当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化controlpUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜。

　　化学感受态细胞注意事项:

　　1、对不稳定DNA的片段克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。

　　2、制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。

　　3、对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。

　　4、化学感受态细胞一般在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。

　　5、转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。

全年征稿/资讯合作 联系邮箱：137230772@qq.com

版权与免责声明

1、凡本网注明"来源：兴旺宝"的所有作品，版权均属于兴旺宝，转载请必须注明兴旺宝，https://www.xwboo.com/。违反者本网将追究相关法律责任。

2、企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容，如涉及侵权、违规遭投诉的，一律由发布企业自行承担责任，本网有权删除内容并追溯责任。

3、本网转载并注明自其它来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。

4、如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。