使用超合相色谱(UPC2)分析短*
超合相色谱用反相液相色谱(RPLC)分析疏水性肽和蛋白质难度很大,因为溶液中经常需要使用洗涤剂保持疏水性物质的稳定性,而这些洗涤剂容易发生聚集和/或沉淀,严重影响它们的回收,这些因素以及其它原因使得难以用RPLC分离疏水性肽和蛋白质。
在本应用纪要中,我们为您介绍一种在ACQUITY UPC2TM系统上使用沃特世(Waters)超合相色谱技术分离典型跨膜肽-短*的方法。
短*是由芽孢杆菌产生的一种常见和已被良好表征的跨膜肽物质,它被用作对抗革兰氏阳性和某些革兰氏阴性细菌的局部用抗生素,超合相色谱短*包括通用组成为甲酰-L-*-*-L-*-D-*-L-*-D-*-L-*-D-*-L-*-D-*-L-X-D-*-L-*-D-*-L-*-氨基乙醇的一族化合物,其中X取决于短*分子,即分别占总短*量约87.5%、7.1%和5.1%的革兰氏A(X=*)、革兰氏B(X=苯*)和革兰氏C(X=*),1需要交替的D和L氨基酸单元构成_-螺旋状。
我们研究了色谱柱化学品、流动相改性剂和梯度斜率对分离短*的影响。采用优化方法分离市场上销售的非处方药物(OTC),将测定的短*浓度与标示量进行对比。采用质谱仪测定短*的浓度,采用选择离子谱表征每种物质。在ACQUITY UPC2系统上使用我们的方法,超合相色谱可得到线性和可重复的结果——测定的OTC制剂浓度为标示量的98.4%。
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