离子交换层析是目前在生物大分子纯化中应用广泛的方法之一。离子交换层析依附于离子交换填料使用。离子交换填料也称为离子交换介质,由基质和配基组成。目前主流的离子交换填料有DEAE,CM,Q,SP,ANX,MMA,MMC.离子交换填料已有70多年的历史,目前离子交换填料也呈现出多样性,主要是其基质的种类越来越多,不同基质的离子交换填料其性能差别很大,下面就分别介绍下主要的离子交换介质及其特点。
一、交联纤维素基质离子交换填料
20世纪50年代中期,Sober和Peterson合成CM纤维素和DEAE纤维素,是用于生物大分子分离早的离子交换填料之一。比较典型的代表是DE52和CM52。市场主要以无定行的居多且大多是干粉状态,使用前需要溶胀。目前使用的越来越少,趋于淘汰。
特点:耐压性小,流速小,趋于淘汰。
二、交联葡聚糖基质离子交换填料
葡聚糖基质离子交换填料是以葡聚糖凝胶(Sephadex)G25和G50为基质,连接不同的离子交换配基构成。比较典型的是DEAESephadexA-50和CMSephadexC-50,市售产品也多以干粉状态,使用前需要溶胀,且溶胀系数较大,C-50溶胀倍数一般大于25倍。由于其孔径较小,耐压性较差,目前也趋于淘汰状态。在起源比较早的生物制品厂使用的比较多。
特点:耐压性差,排阻极限小,使用范围窄,趋于淘汰。
三、高分子聚合物离子交换填料
高分子聚合物离子交换填料的品种比较多,有专门用来分离小分子的树脂,也有用来分离纯化蛋白的聚合物离子交换填料。分离蛋白的聚合物离子交换填料代表的有TSKgelSP-5PW和TSKgelDEAE-5PW,市场上聚合填料种类比较多,有单分散的,也有不是单分散球形的,因其亲水性比多糖要差,目前大多在其表面进行亲水性处理。聚合物离子交换填料有很高的耐压性和均一的球径,相比多糖基质的离子交换填料,其生物相容性,回收率方面略差一些,特别是在疫苗等超大分子纯化时差异更大。聚合物基质离子交换填料在多肽及其它小分子物质纯化中广泛使用。
特点:耐压性高,流速大,生物相容性略差。
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