单细胞ICP-MS应用：评估卵巢癌细胞对*的摄入

铂类*药物是非常*的一类*药物。目前铂类*药物已经研制了三代，分别是一代*，二代*、*；三代*、*。*的有效性是由于其可以与DNA 结合从而导致DNA- 铂（Pt）加合物的形成，但这也会造成DNA 的弯曲。因此在*后细胞必须修复DNA 损伤，否则DNA 复制受阻会导致细胞死亡。

许多癌症患者初对基于铂类的治疗比较敏感，但一段时间后，患者通常对*治疗表现出耐药性，导致了癌症的复发。*耐药性归因于三种主要的分子机制：DNA 修复的加速，胞浆失活的加速和细胞摄取药物能力的变化。其中，细胞摄取药物能力的变化主要表现在细胞对*的摄入能力降低或者*转运的加速。

分析单个细胞水平对*的摄入和分布对于评估治疗的有效性具有非常重要的意义。

传统方法是，将细胞群置于*培养液中，然后使用原子吸收光谱（AAS）或者电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）等技术测定细胞群内铂的总量，无法体现*摄入在个体细胞之间的分布和差异。实际上，细胞对*的摄入有可能根据个体有很大差异，但至今还没有有效的方法来评估。

本文使用全新的技术，可对金属在单一细胞水平上进行定量：单细胞电感耦合等离子体质谱 (SC-ICP-MS)。

01样品

所有实验使用卵巢癌细胞为A2780 和A2780/CP70 细胞系。其中，A2780 是*敏感细胞系, 而A2780/CP70 是*耐药型。

按照下图所示流程处理。

02仪器

NexION® 电感耦合等离子体质谱（ICP-MS），结合Syngistix™ 单细胞应用软件模块进行数据采集和处理。

 NexION 2000 ICP-MS

表1.ICP-MS仪器条件

03实验结果

细胞对*的摄入可利用时间过程实验来研究，即分析*在细胞群内的分布如何随时间变化。将两个细胞系置于30μM*培养液中1，2，4 和8 小时。

如图可见，与*耐药细胞A2780/CP70 相比，A2780 随时间推移能摄入更多的*。

为了判断*摄入的差异性分布是否归因于细胞周期的不同，还对细胞进行了血清饥饿实验。

04结论

SC-ICP-MS 是一种在单细胞水平上稳定测量铂的方法。本文利用卵巢癌细胞系A2780 和A2780/CP70 表征了随着时间增加*的摄入有所增长。相比A2780 敏感细胞系，*摄入在耐药性的A2780/CP70 细胞系上水平降低。*摄入的细胞差异性不是由于细胞周期的不同，因为血清饥饿细胞并不改变*的整体摄入。*摄入的胞内差异性是由于其他尚未确定的因素造成的。

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