方法优化|双硫磷回收率低？月旭带你找到优化方法

在双硫磷的检测中，我们进行了多种不同提取方法实验方案探究。

首先我们按标准方法操作：标准中采用猪肉试样称取5g，加入25ml乙腈-甲醇混合液(4:1，v/v)，超声20 min。以6000 rpm离心5min，移取上清液于一分液漏斗中。再分别用3×15 mL甲醇洗涤试样三次，洗液与前述上清液合并于同一分液漏斗中。在上述分液漏斗中加入50 mL硫酸钠水溶液及25 mL三氯甲烷，振荡5min，静置分层后，接下层有机相，再分别用25 mL三氯甲烷提取两次，合并三氯甲烷提取液，在旋转蒸发器上40℃浓缩至干，加入5mL正己烷以溶解残渣，待净化。

SPE柱：月旭Welchrom® Florisil PR，

规格：4g/12mL。

活化：20mL正己烷，弃去；

上样：待净化液全部上样，弃去流出液；

淋洗：10mL正己烷，弃去流出液；

洗脱：20mL 乙酸乙酯-正己烷（3:7），收集流出液于50mL鸡心瓶中；

40℃旋蒸至干，准确加入1mL正己烷溶解残渣，GC-MS检测。

但在实际提取中并未从猪肉提取目标物，无回收。

在改进提取方法中考虑双硫磷为有机磷，所以参考有机磷的提取方法分别作出以下三种改进：

方法Ⅰ（参考GB 23200.93-2016）:

猪肉试样称取5g，加入5ml乙腈，加入20ml丙酮，10g*超声提取20min，6000r/min离心5min，吸取澄清液于浓缩瓶中，残渣中加入20ml丙酮重复提取1遍，合并提取液，于30℃旋蒸至干，加入5ml正己烷待净化。回收率72%。

方法Ⅱ（参考GB/T 2795-2008）:

猪肉试样称取5g，加入5ml乙腈饱和正己烷，加入20ml正己烷饱和乙腈，超声提取20min，6000r/min离心5min，吸取澄清液于浓缩瓶中，残渣中加入20ml正己烷饱和乙腈重复提取1遍，合并提取液，于30℃旋蒸至干，加入5ml正己烷，待净化(参考GB/T 23204-2008加入正己烷除油脂），回收率54%。

方法Ⅲ:

猪肉试样称取5g，加入20ml乙酸乙酯-环己烷（1:1）超声提取20min，6000 r/min离心5min，吸取澄清液于浓缩瓶中，残渣中加入20ml乙酸乙酯-环己烷（1:1）重复提取1遍，合并提取液，于30℃旋蒸至干，加入5ml正己烷待净化，回收率15%。

对比以上3个方法发现，方法Ⅰ的加标回收率优于方法Ⅱ、方法Ⅲ，但依然不够理想。据此分析原因发现：

方法Ⅰ中提取液旋蒸温度为30℃，比原方法（GB 23200.93-2016）的40℃低，但浓缩时依然存在较为严重的爆沸，导致回收率偏低。

降低浓缩温度至25℃后，回收率比较理想，得到以下的终优化方法。

样品提取：

猪肉试样称取5g（j确至0.1g），加入5mL乙腈，加入20mL丙酮，10g*超声提取20min，6000r/min离心5min，吸取澄清液于浓缩瓶中，残渣中加入20mL丙酮重复提取1遍，合并提取液，于25℃旋蒸至干，加入5mL正己烷带待化。

SPE净化步骤

SPE柱：月旭Welchrom® Florisil PR，规格：4g/12mL。

活化：20mL正己烷，弃去；

上样：待净化液全部上样，弃去流出液；

淋洗：10mL正己烷，弃去流出液；

洗脱：20mL 乙酸乙酯/正己烷，收集流出液于50mL鸡心瓶中；

40℃旋蒸至干，准确加入1mL正己烷溶解残渣，GC-MS检测。

气相条件

质谱条件

色谱图或者加标回收率结果如下：