当心，使用流动相注意这些事了吗

流动相 | 保质期

各位老师知道流动相的保质期有多久吗，经常遇到有老师前来咨询“咱们的流动相能放多久啊，放一星期没事吧”。但是老师，您知道吗，流动相放的时间太长，可是会直接影响您的实验结果呢。在这里就给各位老师说道说道流动相的注意事项。

*动相的贮存

流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。

磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。

二：流动相放置时间的影响

01 有机相挥发：有机试剂组成比例越大，沸点越低，其挥发程度越大，不过对于挥发相对比较好控制，只要密封好就可以；

02 pH值影响：反相色谱流动相往往是缓冲盐，其pH值受有机相的挥发、空气中的二氧化碳等影响，有时甚至浑浊；且不同pH值及不同缓冲盐其受影响程度不同；

03 微生物影响：水相体系时间久了，往往会致生微生物，特别受光照等影响，因此，往往在棕色瓶中储存；另外，如果流动相中有机相比例越大，其越不容易致生微生物；所以根据储存条件及有机相比例不同其有效期不同。

所以各位老师要注意了，液相流动相建议12小时以后和瓶子一起更换的，纯有机相建议12小时抽滤，24小时以后带瓶子一起更换。流动相溶液忌微生物超标，各种菌会导致柱子堵，而产生很多不良影响。我们都知道，室温如果高了，纯水相上午配的下午下班时候都有可能会有微生物繁殖，都需要重新过滤。所以，纯水相要现配现用，别抱侥幸心理偷懒不配，结果误差大的话，随时可能让你返工哦。

三：流动相使用前要用过滤和脱气

流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。

四：流动相需要恢复到室温下使用

流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。

五：避免使用带有腐蚀性流动相

流动相含有浓硫酸、浓硝酸、二氯乙suan、二氯甲烷、丙酮、四氢呋nan、二甲亚砜等溶剂，会对流路中的PEEK树脂管路强度变差、PEEK树脂管容易破裂使溶剂外溅。流动相含有卤素离子的溶剂，如KCl、NaCI、NH₄CI等。对流路中的不锈钢材料有腐蚀作用，以上的溶剂须尽量避免使用。非用不可时，分析完了后，应立刻用蒸馏水把全流路清洗干净。

六：在流动相中加入有机试剂后测量pH值

所谓的pH值，是基于水为溶剂的体系才叫pH值，所以正确的调节缓冲溶液pH值的做法是在水溶液中进行。如果添加了有机溶剂后再测量pH值，这其实与添加之前测量的pH值会有所不同。

然而，重要的一点是操作习惯要保持一致。如果习惯是在添加有机溶剂之后测量pH值，那只要确保每次的操作都是如此就可以了。虽然这样操作不是100%的准确，但至少它与之前的做法是一致的。这对于一个完整的研究来说，相较之你在添加有机溶剂之前测量pH值而获得了一次准确的数据来说，保持一致的操作方法可能会更重要。

七：不要将流动相试剂瓶中的

流动相*用光

假如流动相准备的不够充足，除了存在一定的泵和色谱柱空运行的风险外，还会有其它的问题存在。如由于溶液中水会从试剂瓶的上方蒸发，所以试剂瓶顶部流动相的成分已经发生了改变。如果使用了瓶中后这部分试剂，事实上它们就是原来试剂瓶中顶部的那部分，当它们通过色谱柱时可能会有渣滓滞留在色谱柱中。

八：使用超声给流动相脱气

超声法对于确保所用的缓冲盐*溶解很有效，但它不是z有效的脱气方法，而且由于超声时溶液会快速升温而导致流动相中有机试剂蒸发。为了节省时间，可以花5min时间通过真空过滤机来过滤流动相，这可以一步达到脱气和过滤的两个目的。