Cellsorter高速自动细胞分选-挑选细胞后的成活率分析

Cellsorter高速自动细胞分选

-挑选细胞后的成活率

分选后，将荧光细胞注入并在新的培养皿中进一步培养。NE-4C和3T3细胞在新培养皿中显然具有活力并增殖，从而导致无标记细胞的荧光细胞单培养。由于基于细胞形态的小胶质细胞的生存能力并不直接，因此我们完成了MTT测试。根据分类后的还原能力，大多数小胶质细胞是可行的。

为了量化该技术的分类效率和细胞存活率，我们使用了未标记的3T3和NE-4C细胞。在初步实验中，我们在自动检测细胞后，用孔径为62 mm的微型移液器吸取了数百个3T3细胞，真空度为12,000 Pa。我们发现增加的真空度不会改变细胞存活率。我们还进行了实验，以调查从CD1小鼠制备的原代神经胶质培养物的存活率。用*-EDTA对细胞进行3分钟的预处理，在选择分选并提取细胞的实验中，其存活率为100％。

为了比较分选后的细胞与未分选但通过PDMS表面经过新培养皿的细胞的存活力，采用*-EDTA的常规方法，我们测量了正常传代后的存活率，如``细胞存活率测定''一节中所述'。

短暂（30-60 s）*-EDTA处理后，我们在显微镜的相差模式下捕获的培养图像中手动标记了3-5个细胞。我们调整了连接到微量移液器的注射器的真空度，该注射器的孔径为69 mm，并自动拾取细胞。0真空表示注射器中的环境压力。然后将细胞注射到置于新皮氏培养皿中间的克隆圆筒中，以简化随后的细胞搜索。2小时后，我们在新培养皿中计数了活细胞。拾取效率计算为拾取的选定单元格数与所有选定单元格数之比。平均拾取效率为93 63T3和NE-4C分别为4％和100％。在一些实验中，微量移液器从选择进行分选的细胞附近收集了额外的细胞。这些单元的数量在“拾取的单元数”列中的1信号之后显示。未选择进行排序的单元格的拾取率是该数量与所有选定单元格数量的比率。3T3和NE-4C 的未选择细胞的平均拾取率分别为11 6 12％和6 6 6％。将存活率计算为存活的细胞数与拾取的细胞数之比，包括未选择的细胞。平均生存率为66 6 12％和88 63T3和NE-4C分别为16％。将平均比率计算为样本平均数加权的每个比率的分母，即输入单元格的数量。通过加权样本方差除以实验次数的平方根来近似均值误差