Cellsorter荧光激活高速自动细胞分选系统-微量移液器说明

Cellsorter荧光激活高速自动细胞分选系统

-微量移液器说明

Cellsorter荧光激活高速自动细胞分选系统配置的显微镜的物镜装有微量移液器固定装置（CellSorter），将毛细管保持在样品上方的光轴上。可以使用细螺纹相对于物镜手动提升或降低毛细管。
通过这种手动调整，我们将由白色LED照明的毛细管的定位在物镜的焦平面上，其精度受到物镜景深的限制。
此后，将毛细管相对于物镜固定并由显微镜聚焦驱动器控制。
平行于光轴的微量移液器的定位精度由物镜的景深（3.9 mm）和精细聚焦旋钮决定。 当微量移液器接近表面小于10 mm时，分选分辨率更好。

对于流体控制，Cellsorter荧光激活高速自动细胞分选系统使用了一个高速电磁液体阀（AL3112，Asco），该阀连接到一个由注射泵（NE-1000，New Era Pump Systems）控制的50 ml注射器上。该电磁阀的标准响应时间为5毫秒。
根据我们的测试结果，短的可重复打开状态的周期为8 ms。我们在分选实验中使用此参数值操作阀门。
通过在恒定温度下将空气的初始体积V0（对应于环境压力p0）增加到内部V来调节注射器中的真空，从而获得终压力。保持一定的压力差，比可能的管道弹性变形和在几个拾取动作中从皮氏培养皿中吸出的液体量高几个数量级，以确保在分选实验期间注射器中的真空恒定。

当拾取50个以上的细胞时，我们通过以50次拾取操作从培养皿中提取的液体的估计总体积（通常为50毫升）来增加其体积，从而补偿了注射泵中的真空损失。

我们将检测到细胞后的分选过程的持续时间限制在15分钟以内，因为活动细胞会依次离开其初始位置，从而导致微量移液器的定位不正确。

每次实验后，我们通过用微量移液管吸去离子水和96％的乙醇来清洗整个流体控制系统，以避免污染。

微量移液器可在多个实验中重复使用而不会发生堵塞。从培养皿中取出的微量移液器中的培养基干燥会导致堵塞，通常可以用水溶解。微量移液器可在多个实验中重复使用而不会发生堵塞。