非洲猪瘟病毒检测实操方案

非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是由非洲猪瘟**感染家猪和野猪后产生的一种烈性传染疾病。此疫情从2018年8月传入我国后，迅速大范围蔓延，截至今日，已席卷大半个中国，对养猪业造成了重大的威胁和不可估量的经济损失。

非洲猪瘟**是一种具有囊膜结构的双链DNA**，感染家猪和野猪后引起高热、出血和高死亡率。PCR方法由于具备高灵敏度、高特异性和快速的特点，被用于非洲猪瘟**的检测。
      下面结合实际操作应用，跟大家分享一套可靠的非洲猪瘟**检测方案。

                              非洲猪瘟感染组织样本和蜱类样本的前处理

      非洲猪瘟易感的对象主要包括家猪，野猪和蜱，通常采集的样品为血液、组织和蜱三类。对于组织样本和蜱，在核酸提取前需要对样本进行充分的破碎，使其核酸充分地释放出来，才能进行后续的检测和诊断。

MM400高通量组织研磨仪可对非洲猪瘟感染动物组织或蜱进行充分破碎、混合、均质化

德国莱驰（RETSCH）MM400研磨仪可谓是组织样本前处理界的专家，也是各实验室样品粉碎的“多面手”，深受各行业用户的喜爱和信赖。其对于动植物组织的细胞破碎可同时处理多达10、20、48、192个样品，典型样品如：各种动物组织、植物组织、细菌、酵母等样本。研磨中样品管独立且密封，无需担心交叉污染问题，保证您的样本安全。典型研磨时间30s-2min，可处理样品，提高工作效率。

                     MM400冷冻混合研磨仪

                           MM400冷冻混合研磨仪部分配件

具体猪瘟感染组织类研磨方案可参考以下步骤


                                          MM400冷冻混合研磨仪实验


               
                    猪瘟**的检测——PCR方法
 

1、研磨后的样品，离心后取上清液200ul，进行核酸纯化；
2、PCR法检测ASFV**

       现行ASFV（非洲猪瘟**）主要实验室检测方式分为ASFV**检测和ASFV抗体检测。在所有方法其中很受关注的是PCR法，PCR已成功应用于猪样品（血液、器官、肉制品等）和蜱中ASFV基因组的检测。ASFV为DNA**，核酸稳定性高，所有经过验证的PCR技术均可以在活体猪临床症状出现前实现检测。PCR是可以代替**分离鉴定的一种灵敏、特异、快速的ASFV 检测技术。同时，相比于抗原检测技术，如酶联免疫吸附试验（ELISA），PCR具有更高的敏感性和特异性。PCR技术本身还分为成本较低的普通PCR电泳法和速度更快的实时荧光PCR法（qPCR）。

      OIE 在《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2016年）中*使用的常规和实时荧光PCR得到了*的充分验证，是常规诊断的重要工具。引物和探针多以VP72编码区域作为靶基因设计，同样可检测的编码**结构蛋白基因还有p54、K205R等，基因越稳定、在宿主体内复制转录越早则越适合作为PCR靶基因。

      对于特急性、急性或亚急性ASF感染病例，PCR是优选的检测技术。
德国RETSCH实验室可为感兴趣的老师提供样机，欢迎垂询！