常规反相色谱柱安装及使用维护指南

新色谱柱开启和安装的*步骤：

1. 开启色谱柱的包装盒，查看色谱的测试报告；

2. 根据色谱柱身上箭头标明的流向先将色谱柱入口端连入系统，柱出口端先不要连接；

3. 0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2 min内将流速升至0.5 mL/min;

4. 当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上；

5. 重启流速，然后在0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱30 min，在10 min内将流速升至1.0 mL/min冲洗30 min。

6. 参考柱效测试报告中的方法，30 min内将流动相梯度转换到柱效测试的流动相条件，然后使用5-10倍柱体积的流动相平衡色谱柱，直至压力与基线稳定。

7. 测试柱效。如果柱效与出厂报告偏移过大，或峰形拖尾就需要进行故障排查或联系上海易创分析仪器有限公司。

反相色谱柱的清洗与再生：

1. 发现柱压升高，色谱峰出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔，或分离度降低，有可能是样品溶解度、色谱柱温度、碱性化合物干扰，也很有可能是色谱柱受污染，可以采取以下措施：

2. 如系统有连接在线过滤器或保护柱，首先排查在线过滤器与保护柱，可能需要更新。

3. 使用纯有机相低流速冲洗过夜。（如有使用缓冲盐，应使用不含缓冲液的流动相冲洗1h，然后再梯度过渡到纯有机相低流速冲洗过夜。）

4. 如有机相清洗不能解决问题，可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品的性质以及你了解的污染物性质选择清洗方法，用20-30倍柱体积（4.6*250 mm分析色谱柱大约80-120 mL溶剂清洗，流动相温度升至30-50 ^oC，然后再重复步骤3的方法。

5. 氨基柱

反相色谱柱的保存：

1. 反相色谱柱应保存于纯有机相中（如乙腈或甲醇）。色谱柱使用于高温或pH条件下，或停用超过48小时，应当进行简单的清洗过程；

2. 清洗首先用不含缓冲盐的流动相冲洗20-30倍柱体积, 然后30 min内梯度过渡到纯有机相，再用纯有机相冲洗20-30倍柱体积；

3. 后使用原配的柱堵头拧紧，确保堵头溶剂不会挥发。若是氨基柱则应该在步骤2中添加0.1%的氨水，有利于延长氨基柱的寿命；