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告诉你荧光分光光度计的原理小知识

2022
01-16

08:50:02

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来源:上海棱光技术有限公司
  由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。
  物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光.
  不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱;,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
  在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
  荧光分光光度计的功能特点
  1. 荧光发射光谱
  选择某一固定波长的光激发样品,记录样品中产生的荧光发射强度与发射波长间的函数关系,即得荧光发射光谱。
  2. 荧光激发光谱
  选定某一荧光发射波长记录荧光发射强度作为激发光波长的函数,即得荧光激发光谱。
  3.时间分辨技术;
  可用于对混合物中光谱重叠但有寿命差异的组分进行分辨并分别测量。
  时间分辨荧光测定公式如下:
  P(t) = P0 EXP (-t /τ)
  式中P(t):拟合指数函数
  P0:强度取值
  EXP:指数运算符
  t:时间取值
  τ:荧光平均时间寿命
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