转基因Cry2A试剂盒-转基因Cry2A试剂盒-浙江托普云农科技股份有限公司事业部

转基因 Cry2A 试剂盒用特异性抗 Cry2A 单抗包被的微孔板和酶标记抗 Cry2A 单抗，双抗体夹心法检测 Cry2A 基因表达产物，可以高灵敏度和特异性来检测转基因植物中的 Bt-Cry2A 蛋白。

【转基因Cry2A试剂盒检测原理】
该试剂盒用特异性抗 Cry2A 单抗包被的微孔板和酶标记抗 Cry2A 单抗，双抗体夹心法检测 Cry2A 基因表达产物，可以高灵敏度和特异性的检测转基因植物中的 Bt-Cry2A 蛋白。

【试剂盒组份（规格）】
预包被板（抗 Cry2A 单抗）      12 孔×8
Cry2A 酶标抗体                 12 ml×1 瓶
20×浓缩洗涤液                      30 ml×1 瓶
5×抽提液/稀释缓冲液                30 ml×1 瓶
底物液 A                            7 ml×1 瓶
底物液 B                            7 ml×1 瓶
终止液                              7 ml×1 瓶
使用说明书                          1 份
0ppb 阴性对照                       1ml
3 个不同浓度的标样：
1 ppb， 5 ppb，10 ppb            各 1ml

【试剂准备】
试剂盒中的 20×浓缩洗涤液 30 ml 加 570 ml 灭菌 ddH2O 溶解稀释至 1×洗涤液，
5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀释至 1×抽提液，4 ℃存放备用。

【样品准备】
称取约 20 mg 叶片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室温）研磨至匀浆，室温放置 30 min，测定前把样品上清液稀释 5-20 倍。
测定茎干和胚乳中的 Bt 蛋白时，样品称取约 40 mg，加 1ml 1×抽提液研磨。

【ELISA 反应】
1. 依次加 100 μl 阴性对照，标准品（3 个不同浓度的标样： 1 ppb， 5 ppb，10ppb）和待测样品至 96 孔板；
2. 用封口膜盖住 96 孔板，快速摇动平板混匀样品；
3. 37 ℃恒温箱孵育 30 min；
4. 倒掉 96 孔板中液体，用 1×洗涤液每孔 250 μl 洗涤微孔板，漂洗 5 次，用吸水纸拍干；
5. 按顺序在每个小孔中加入 100 μl Cry2A-酶标抗体，然后重复步骤 2；
6. 37 ℃恒温箱孵育 30 min；
7. 倒掉 96 孔板中液体，用 1×洗涤液每孔 250 μl 洗涤微孔板，漂洗 5 次，用吸水纸拍干；
8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重复步骤 2；
9. 37℃恒温箱孵育 10 min，加 50μl 终止液，充分混匀终止反应，15 min 以内在酶标仪上读取结果。在 450 nm 为主波长，630 nm 为次波长（或单波长 450 nm）下，用空白孔校零，再读取各孔 OD 值。

【操作注意事项】
1. 测定中需使用的所有试剂和 96 孔板提前 30 min 放置室温温育（否则会影响试验准确性），注意 12 连管必须温育后再从平板上取下，未使用完的预包被板条应置于有干燥剂的封口袋中密封保存；
2. 试剂使用前应充分摇匀；
3. 摇动平板混匀时注意避免样品之间交叉污染；
4. 使用洗涤液漂洗时，洗涤液需要填满每个小孔，进行充分漂洗；
5. 研磨好的样品如果不能一次全部测量，可以暂时在 4 ℃避光保存，但是在 24 h 内测定；
6. 结果判读请在反应终止后 15 min 内完成。

【Bt 蛋白浓度计算公式】

Bt 蛋白浓度（μg/g）=