森贝伽带您详细了解葡聚糖凝胶

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葡聚糖凝胶是一种具有三维网状结构的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成的，交联度越大，网孔结构就越紧密，吸水后的体积膨胀就越小，能允许进入凝胶内部的分子的分子量也就越小，反之亦然。层析时，大于凝胶孔径的大分子，被阻于凝胶相外，沿着凝胶颗粒之间的间隙走，下移速度zui快，故zui先洗脱下来，中分子物质部份进入凝胶内部，洗脱速度为其次，而小分子物质因全部进入凝胶，受到阻力zui大，故zui后被洗脱下来，如此物质得到分离。

2. 产品特性(以g-25为例)

2.1 化学和物理性质

葡聚糖凝胶G-25是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。型号G表明每克于凝胶吸水量的多少，G-25表明每克干凝脱胶吸水2.5毫升。这表征了凝胶所能膨胀的倍数，亦间接表征了凝胶孔径的大小。 葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

2.2 化学稳定性

    葡聚糖凝胶G-25不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。*接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

2.3 物理稳定性

    葡聚糖凝胶G-25并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。

3 G-25使用操作方法

3.1 乙醇浸泡

在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用去离子水洗去残存的乙醇滤干。

3.2 去离子水浸泡

室温下，在去离子水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的*溶胀。

3.3 盐酸浸泡

在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性。

3.4 装柱

将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层。

3.5 平衡

上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）

3.6 上样

凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50 cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。

3.7 洗脱方法

可以用去离子水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化。

3.8 在位清洗（CIP）

凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。