人胃腺癌细胞配制培养基之生长测试

4.1. 材料：

4.1.1. MDCK cell （ATCC CCL-34 或CCRC 60004）

4.1.2. 6-well TC plate （or 35 mm TC dish）

4.1.3. methanol

4.1.4. glacial acetic acid

4.1.5. 10 % Giemsa solution （GibcoBRL 10092-013）

4.2. 步骤：

4.2.1. 以待测试培养基培养MDCK cell，接种MDCK 细胞于6-well plate （或35 mm TC dish） 中，每个well 接种1 × 102 活细胞，同时作对照组实验。

4.2.2. 接种5～7 天后，在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长，待细胞群 落大到可以肉眼观察，而群落间不互相接触时即可。

4.2.3. 去除培养基，加入1 ml Carnoy’s 固定液（甲醇：冰醋酸﹦ 3:1），室温下静置10 min。

4.2.4. 去除固定液，水洗二次。

4.2.5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution，，室温下静置染色2-3 min。

4.2.6. 去除染液，水洗二次。

4.2.7. 以肉眼计数群落数，并比较之，若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳，则丢弃之。

抗生素

1. 细胞库之细胞培养基不加抗生素

1.1. 培养自ATCC 引进之细胞株，培养基中不加抗生素。

1.2. 培养自其它实验室引进之细胞株，制作token freeze 前培养基须添加抗生素，待 token freeze 通过污染测试后，大量培养时则不加抗生素。

2. 寄送活细胞时，须将培养液充满整个flask 时，则须添加抗生素（penicillin 100 units/ml + streptomycin 100 ug/ml）。

3. 若要检测mycoplasma，则培养基内不可添加gentamicin，因gentamicin 会抑制mycoplasma 生长。

4. 去除细菌污染之抗生素混合配方: penicillin 250 units/ml, streptomycin 250 ug/ml, neomycin 250 ug/ml, bacitracin 2.5 units/ml，注意混合使用后药物毒性会增强。

5. 抗生素使用种类与浓度：