流式】CytoFLEX蠕动性样品传输系统能测激动剂活化后胞内钙离子变化

制备鉴定激素和神经递质受体活性的荧光抗体或遗传标记物不仅困难重重，而且非常耗时。本文介绍了一种有用的替代方法，其可用于记录激动剂与其同源受体（其中的许多受体为G 蛋白偶联的受体）结合所产生的生理反应变化。当激动剂与G 蛋白偶联的受体结合时，可触发一系列快速级联反应，通常会导致胞内储存部位瞬间释放出钙离子。以往在流式细胞术中，已将胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）的瞬时变化用于鉴定细胞亚群中的功能性受体表达[2]，在此，我们发现，新的CytoFLEX 分析仪的蠕动样品传输系统特别适用于基于激动剂的钙离子研究。使用基于酯类的绿色荧光钙指示剂⸺ Fluo-4 AM（LifeTechnologies），可测定HEK-293 细胞在ATP 刺激反应中出现的 [Ca2+]i 变化。简单改进CytoFLEX分析仪的管路，能更容易进入应用激动剂的样品管；而对其作出的进一步改进，则可以实施 “停止时间”检测法。通过将激动剂反应用作我们试验的生理学判定标准，我们基本能够进行受体鉴定，并结论性地证明其功能性。（作者：Ira Schieren1  Peter Racanelli2 Damian Williams3
所属单位：1. Howard Hughes 医学研究所，哥伦比亚大学医学中心  2. Beckman Coulter Inc., Miami, United States  3. 病理学和细胞生物学系，哥伦比亚大学医学中心）